蝴蝶兰病毒病发生与防治（二）

　　(上接2527期3版)
　　三、病毒病种类及特性
　　有记录显示，截至目前，至少有28种病毒曾经感染兰科植物。据调查，中国兰科植物感染的病毒以东亚兰嵌纹病毒(Cymbidiummosaicvirus，简称CyMV)、齿舌兰轮斑病毒（Odontoglossumringspotvirus，简称ORSV）这两种病毒复合感染为多数，也有少数蝴蝶兰感染胡瓜嵌纹病毒（Cucumbermosaicvirus，简称CMV）。以上三种病毒病是在很多兰园中分布非常普遍的病害。ORSV与CyMV之所以广泛存在于兰园中，主要是在栽培过程中人为传播所致。现将这三种病毒的特性分别介绍如下：1.东亚兰嵌纹病毒(Cymbidiummosaicvirus，简称CyMV)（1）病征：被CyMV感染的蝴蝶兰植株经常有产生坏疽形病征的倾向，如黑色坏疽斑点、坏疽条纹等，产生部位除叶部、茎部外，花部坏疽也是CyMV特有病征。由于坏疽斑有时只出现于叶片下表面，而不发生于叶片上表面，因此常被栽培者误认为真菌感染所致。部分感染CyMV的蝴蝶兰也会产生黄绿斑驳的嵌纹或黄化条斑形病斑。在人工栽培的兰园中，CyMV与
　　ORSV复合感染同一兰株的现象极为普遍，对兰株的影响有加成效果，病征会远比单独感染时严重许多。另外也有部分兰花种类感染后并不表现任何可辨识病征。
　　（2）病原菌：分类：CyMV属于马铃薯X群病毒。
　　分布：CyMV被认为是全球各地人工栽培兰株上发生最普遍的病毒。根据报告，共有包括嘉德丽亚兰及蝴蝶兰等30种兰属植物可以被CyMV感染，而且均属人工栽培一段时间的兰株，野生兰株中未有任何病毒感染的情况，这表明，CyMV病毒感染植株与人工栽培有密切关系。
　　（3）寄主：其天然寄主以兰科植物为主。（4）形态及传播方式：
　　CyMV病毒形态为丝状易弯曲颗粒，长度为415至475纳米，宽度为13至18纳米。传播方式主要借助机械性伤口传染，未发现有任何昆虫可以传播此病毒。兰园中可经由病株汁液、工具、栽植过病株的盆钵、重复使用的植材、兰株间的直接接触，甚至灌溉水传播此病毒。另外近年来兰花种苗生产常用分生组织培养，这也是该病毒传播的一项极普遍而有效的途径。
　　（5）诊断技术：利用观察病征的方式进行诊断，少数兰花种类被感染后可以稳定出现典型病征，但对于大多数兰花种类而言，被CyMV感染后所表现的病征并不稳定，因此，只依据病征诊断并不可靠。事实上兰花感染病毒后常需一段时日才会表现出病征，CyMV病征潜伏期的长短，随兰花种类及其生长状态而有所不同，有些兰花种类甚至根本不出现病征。若只依赖病征表现作为判别感染的唯一依据，则有可能延迟诊断或者得出错误诊断，从而常会导致病毒扩大流行，故应配合其他更敏感的方法进行诊断方为最佳方案。
　　（6）应用于CyMV诊断的方法：①指示植物接种法：可利用指示植物进行诊断，如Cassiaoccidentalis、C.amaranticolor、C.quinoa、Tetragoniaexpensa及Daturastramonium等，这些
　　植物被CyMV感染后会出现局部病斑。然而影响接种成功与否的因素很多，除非操作者经验丰富，否则误诊的机会仍然很大。而且若以此作为例行的鉴定方法则必须有设备良好、空间足够的温室与维护管理人工。
　　②电子显微镜观察法：此乃以观察病株是否有CyMV的典型病毒颗粒作为判别的依据。另外配合专一性抗体的应用也能提升电子显微镜观察的敏感度。
　　③光学显微镜观察法：利用染色法观察病毒在寄主细胞内所形成的内含体，根据报告，CyMV在寄主细胞质中会产生带状内含体，可作为判别的依据。
　　④抗血清鉴定法：此乃目前各种检查法中应用最普遍的一种。常用的血清鉴定法包括免疫扩散法(SDS-
　　immunodiffusiontest)、酵联抗体法
　　(ELISA)及免疫点渍法(immunoblotting
　　test)三种。⑤核酸检查法：以病毒核酸为检测对象，常用方法包括核酸探针杂配法(DNAprobehybridization)，及晚近生物技术上所广泛应用的聚合酵素连锁反应(polymerasechainreaction,简称
　　PCR)均可适用于CyMV的鉴定。（7）发生：有报告指出，在野生兰株中未发现有感染CyMV病毒的情况，因此推测兰花CyMV病毒的发生与人工栽培有密切关系。到底最初兰花CyMV病毒从何而来已无法追究，但此病毒广泛存在于全世界各地的兰园。报告显示CyMV的普遍发生与人工栽培时所采取的无性繁殖方式有绝对关系。其次，CyMV是一种性质极为稳定的病毒，在离开寄主细胞后，虽无法繁殖其个体，但仍可存活相当时日，人工栽培兰花时任何可以造成机械性伤口的机会，均可导致病毒传播，加上近年来兰花产业逐渐规模化以后，为了达到快速繁殖种苗而采用组织培养技术，更加速了病毒的全面蔓延，而世界上各地区的贸易交流及运输网络的加强，更是兰花病毒全球分布的主要因素。当然近百年来当兰花逐渐由贵族花卉转变成平民化花卉时，在快速量化的过程中，人们对于病毒检疫的忽视也是造成兰花病毒广泛分布的另一项重要原因。
　　（8）防治方法：①栽植无病毒种苗。收集外来品种时，引入前须先经病毒鉴定，确定无病毒者再引入种植。
　　②就可疑携带病毒植株进行病毒鉴定，确定感染病毒者立即销毁植株、植材及盆钵。
　　③养成栽培过程中避免造成任何植株受伤的习惯，例如浇水时避免过度激烈冲刷，以减少植株间叶片磨擦受伤的机会。
　　④避免重复使用未经处理的植材及盆钵。
　　⑤避免过度密植，以减少植株间机械磨擦受伤的机会；避免立体式栽植，或使灌溉水有在不同植株上相互流通的机会。
　　⑥分生组织培养前母株须经病毒鉴定。
　　⑦移植种苗时避免在同一容器内一起浸药。
　　⑧切花或操作用工具必须消毒。对工具常用的消毒方法有以下几种：
　　干热消毒法：利用烘箱将工具在180℃至少1小时。
　　湿热消毒法：将工具浸于沸水中至少15分钟。
　　火焰消毒法：将工具上接触过植物汁液的部位以火焰烧10至20秒。
　　化学药品消毒法：用5%氢氧化纳或3%至10%磷酸三钠溶液浸泡工具，至少1分钟。
　　牛奶消毒法：用鲜奶浸泡工具后可立即使用（注：对ORSV病毒无效）。
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　　感染CyMV病毒的蝴蝶兰叶片出现坏疽及凹陷的斑块。
　　□上海鼎汉生物科技有限公司 苏俊明 张友强文/图